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    人弓形蟲抗體(ToxAb) 酶聯免疫 分析研究

    發布時間: 2019-08-16  點擊次數: 2224次

    人弓形蟲抗體(ToxAb) 酶聯免疫 分析試劑 盒使用說明書
    本試劑盒僅供研究使用  96T
    使用目的:
    本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中弓形蟲抗體(Tox Ab)表達。
    實驗原理
    本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人弓形蟲抗體(ToxAb)表達。用純化的抗原包被微孔
    板,制成固相抗原,可與樣品中弓形蟲抗體(ToxAb)相結合,經洗滌除去未結合的抗體和其
    他成分后再與 HRP 標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經過*洗滌后加
    底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。
    用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(OD 值),與 CUTOFF 值相比較,從而判定標本中人
    弓形蟲抗體(Tox Ab)的存在與否。
    試劑盒組成
    1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
    2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶
    3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶
    4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
    5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
    6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
    標本要求
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
    馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟
    1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照 2 孔、空白對照 1
    孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
    2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl。然后在待測樣品孔先
    加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不
    觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
    3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
    4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
    重復 5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同 3。
    8. 洗滌:操作同 5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    10 分鐘.
    10.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
    11.測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
    液后 15 分鐘以內進行。
    計算和結果判定:
    試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
    臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
    陰性判定:樣品 OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為弓形蟲抗體(Tox Ab)陰性
    陽性判定:樣品 OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為弓形蟲抗體(Tox Ab)陽性

    注意事項
    1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
    2.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
    用完,板條應裝入密封袋中保存。
    3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    5.底物請避光保存。
    6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為 630nm
    7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸,使用時必須
    注意安全。
    保存條件及有效期
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6 個月

     

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